什么是PCR擴增儀技術？
點擊次數(shù)：2475 更新時間：2017-10-23
什么是
PCR擴增儀技術？
什么是PCR技術？是一種在體外擴增核酸的技術。PCR的基本反應包括以DNA為模板的反應和以mRNA為模板的反應。PCR技術是模擬體內(nèi)天然DNA（脫氧核糖核酸）的復制過程。以擴增DNA為例，其基本原理是在模板、引物、4種dNTP和耐熱DNA聚合酶存在的條件下，特異擴增位于兩段已知序列之間的DNA區(qū)段的酶促合成反應。
PCR擴增儀的工作原理：
PCR反應一般設置20~40次循環(huán)，每一循環(huán)包括高溫變性、低溫退火、中溫延伸三步反應。每一循環(huán)的產(chǎn)物作為下一個循環(huán)的模板。PCR的擴增效率很高，如果循環(huán)次數(shù)是30次，那么新生DNA片段理論上達到230拷貝（約為109個分子）。
PCR反應每個循環(huán)的三個基本反應步驟如下：
①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA產(chǎn)物解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；
?、谀０錎NA與引物的退火（復性）：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合；
?、垡锏难由欤簻囟壬?2℃左右，DNA模板－引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈。重復循環(huán)變性--退火--延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。到達平臺期（Plateau）所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。PCR技術的特異性取決于引物與模板結合的特異性。
PCR擴增儀是利用PCR技術對特定基因做體外的大量合成，用于以檢測DNA/RNA為目的的各種基因分析。
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